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miRNA實驗解決方案（操作手冊）---第一章：miRNA簡介

發(fā)布時間： 2025-01-07　　點擊次數(shù)： 1023次

一、miRNA的合成途徑
在動物細胞核中，miRNA基因的初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Pri-miRNA（長度大約為300～1000 nt）被RNase IIl-Drosha 酶切割成為發(fā)夾結(jié)構(gòu)前體 miRNA（Pre-miRNA，長度大約為70～100nt）。經(jīng)過初步剪切后，Pre-miRNA在轉(zhuǎn)運蛋白Exportin-5的作用下由細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運到細胞質(zhì)中，然后由另一種RNase Ill-Dicer 酶進一步切割產(chǎn)生成熟的miRNA（長度大約為21～23 nt）。成熟的miRNA與類似RISC的核糖體蛋白結(jié)合形成miRNA-RISC復(fù)合體，從而引起靶mRNA降解或者翻譯抑制。miRNA參與胚胎發(fā)育、細胞分化、細胞增殖、細胞凋亡、細胞死亡、免疫調(diào)節(jié)以及物質(zhì)代謝等過程。

植物miRNA的形成過程全部是在細胞核中完成的，不存在Pre-miRNA從細胞核到細胞質(zhì)轉(zhuǎn)運過程。首先，細胞核中編碼miRNA的基因在RNA聚合酶II的作用下轉(zhuǎn)錄形成Pri-miRNA，然后在Dicer酶-DCL1的作用下形成Pre-miRNA，DCL1繼續(xù)作用于Pre-miRNA從而形成成熟的miRNA，以上過程均在細胞核中完成。成熟的miRNA或者是在細胞核中與類似RISC的核糖體蛋白結(jié)合形成miRNA-RISC復(fù)合體，然后被核轉(zhuǎn)運蛋白HST運送到細胞質(zhì)中，或者是先被HST運送到細胞質(zhì)中，再與核糖體蛋白結(jié)合形成miRNA-RISC復(fù)合體。miRNA影響植物的生長發(fā)育、激素的調(diào)節(jié)、信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)、植物病害和應(yīng)答環(huán)境脅迫。

二、miRNA的特性
miRNA最典型的特性就是兩點--保守性和特異性。
·保守性
miRNA的結(jié)構(gòu)和序列在物種之間幾乎保持不變。
結(jié)構(gòu)的保守性：無論動物體還是植物體，miRNA的生成途徑都是由莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體切割成為成熟體；
序列的保守性：miRNA的序列在不同物種中的差距極小。
·特異性
miRNA的表達分布具有時間區(qū)別和空間區(qū)別。
時間的特異性：在個體不同的發(fā)育階段，miRNA的表達量不同；
空間的特異性：在個體的不同組織中，miRNA的表達量不同。

三、miRNA序列查找
常用的查找miRNA數(shù)據(jù)庫--miRBase和TarBase。
該數(shù)據(jù)庫提供已發(fā)表的miRNA序列，注釋查詢，定位，發(fā)卡序列以及命名服務(wù)等信息的數(shù)據(jù)庫。
該數(shù)據(jù)庫人工搜集了實驗驗證過的miRNA的靶基因，包括在人、小鼠、果蠅、蠕蟲和斑馬魚中的miRNA的靶基因。

四、miRNA產(chǎn)品選擇指南
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