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WB蛋白樣本煮多久合適？

發(fā)布時(shí)間： 2024-04-28　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1490次

WB蛋白樣本煮制時(shí)間的那些事兒
大家在進(jìn)行 WB 實(shí)驗(yàn)時(shí)，可能會(huì)有這樣的疑問(wèn)：蛋白樣本到底煮多久合適呢？??
通常來(lái)說(shuō)，WB 蛋白樣本的煮制時(shí)間在 3-5 分鐘左右。不過(guò)，這只是一個(gè)大致的范圍哦，具體時(shí)間還得根據(jù)實(shí)際情況來(lái)調(diào)整。
通常6孔板細(xì)胞80%以上密度，需200ul，其他按平板面積比類推。
在煮制蛋白樣本時(shí)，有幾點(diǎn)需要注意哦：
1.煮制時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，不然可能會(huì)導(dǎo)致蛋白變性，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果;
2.煮制溫度控制在95-100°C之間為宜;
3.煮制過(guò)程中要記得混勻樣本，確保樣本受熱均勻。
當(dāng)樣品核酸、蛋白濃度過(guò)高時(shí)，煮樣后會(huì)發(fā)現(xiàn)槍頭吸不上來(lái)，非常粘、一砣一砣的，很容易堵住槍頭。
這時(shí)候建議兩種處理方法：
1.再煮5min。常規(guī)煮樣時(shí)間3-5min，樣品過(guò)濃時(shí)就煮10min；
2.如果10min煮樣后，仍然吸不起來(lái)，才適當(dāng)增加buffer，繼續(xù)煮；也可以對(duì)樣品進(jìn)行超聲。煮樣時(shí)間若過(guò)長(zhǎng)，蛋白會(huì)凝固，此時(shí)已失去繼續(xù)WB的意義，請(qǐng)丟棄（判斷標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)明顯的蛋白沉淀和水分層）。
如果你對(duì)煮制時(shí)間拿不準(zhǔn)，不妨先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，找到最恰當(dāng)的煮制時(shí)間吧！

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