細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的神奇細(xì)胞器：脂滴

發(fā)布時(shí)間： 2024-01-30　　點(diǎn)擊次數(shù)： 2884次

今天我們要來(lái)聊一下細(xì)胞結(jié)構(gòu)里面的一個(gè)神秘小東西-脂滴

沒(méi)錯(cuò)沒(méi)錯(cuò)，你沒(méi)看錯(cuò)！這就是那些小小的圓圓的、像是浸泡在脂肪里的小球球！它們的外觀看起來(lái)就像是脂肪掉進(jìn)了細(xì)胞里，而且它們還有著各種神奇的功能。

那么，脂滴到底是什么呢？它們是由一種叫做“脂質(zhì)"的化學(xué)物質(zhì)組成的。脂滴是脂質(zhì)和能力穩(wěn)態(tài)中心的儲(chǔ)存細(xì)胞器。它們具有不一樣的結(jié)構(gòu)，由中性脂質(zhì)的疏水核心組成，該核心由磷脂單層包圍，磷脂單層由一組特定的蛋白質(zhì)修飾。脂質(zhì)本質(zhì)上就是脂肪酸和甘油的混合物，它們?cè)诩?xì)胞里的主要功能就是作為能量?jī)?chǔ)備。

脂滴不僅僅是細(xì)胞內(nèi)的能量?jī)?chǔ)備庫(kù)，它們還可以幫助細(xì)胞進(jìn)行重要的功能。如蛋白質(zhì)降解、隔離轉(zhuǎn)錄因子和染色質(zhì)成分以及為某些核受體生成脂質(zhì)配體。此外，病毒核衣殼蛋白核心本身可與脂滴表面結(jié)合并協(xié)調(diào)病毒感染的持續(xù)傳播。它們可以幫助調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的代謝過(guò)程，幫助細(xì)胞在不同的生理狀態(tài)下更好地運(yùn)作。此外，脂滴還可以作為一種儲(chǔ)存信號(hào)分子的地方，這些信號(hào)分子可以在需要的時(shí)候釋放出來(lái)，幫助細(xì)胞完成一些復(fù)雜的生化反應(yīng)。

脂滴看起來(lái)很小，但它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的重要性不可小覷。當(dāng)人體內(nèi)能量供應(yīng)充足的時(shí)候，脂滴會(huì)不斷地增加，以?xún)?chǔ)備能量；而當(dāng)人體需要能量的時(shí)候，脂滴又會(huì)迅速地釋放出來(lái)，為身體提供能量支持。

那么，脂滴在我們的身體里面到底長(zhǎng)什么樣呢？其實(shí)，它們的外觀有點(diǎn)像一個(gè)個(gè)小圓球，通常都位于細(xì)胞的中央?yún)^(qū)域，但也會(huì)分布在整個(gè)細(xì)胞內(nèi)。如果你有看過(guò)一些細(xì)胞結(jié)構(gòu)的圖像的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)，脂滴通常會(huì)在圖像上顯示成一個(gè)個(gè)小點(diǎn)點(diǎn)，而且數(shù)量通常也很多。小小脂滴如何檢測(cè)呢？

1. C11 BODIPY 581/591

C11 BODIPY 581/591 (Catalog No.: GC40165) 是一種 BODIPY 氟硼熒衍生物，具有良好的光穩(wěn)定性、低熒光偽影特質(zhì)。C11 BODIPY 581/591 常用于活細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化比率和抗氧化性能的研究，或與羥基自由基反應(yīng)、檢測(cè)鐵死亡 (ferroptosis)。C11 BODIPY 581/591 發(fā)射波長(zhǎng)為 591 nm (還原型)，或紅移至 510 nm (氧化型)；激發(fā)波長(zhǎng)分別為 581 nm (還原型)、500 nm (氧化型)。

1. 細(xì)胞制備：

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，加入 PBS 洗滌兩次，每次 5 分鐘。

貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，加入胰蛋白酶消化細(xì)胞。離心棄去上清后，加入 PBS 洗滌兩次，每次 5 分鐘。

2. 加入 1 mL C11 BODIPY 581/591 工作液，室溫孵育 15 分鐘。

3. 400 g，4℃ 離心 3-4 分鐘，棄去上清。

4. 加入 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次 5 分鐘。

5. 用熒光顯微鏡拍照，設(shè)置氧化型的激發(fā)光和發(fā)射光分別為460–495nm 和 510–550nm。還原型激發(fā)光和發(fā)射光分別為565–581nm和 585–591nm。

2. BODIPY 493/503

BODIPY 493/503 (Catalog No.: GC42959) 是一種親脂性熒光染料，發(fā)出亮綠色熒光，已廣泛用于脂質(zhì)滴標(biāo)記（Ex/Em:493/503 nm）。BODIPY 493/503與熒光、共焦和雙光子顯微鏡以及流式細(xì)胞儀兼容，可用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞。

1. 在與研究相關(guān)的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)細(xì)胞。（例如，35 mm 孔中有 50,000 個(gè) A498 細(xì)胞。）

注意：細(xì)胞與 30 μM 油酸一起孵育過(guò)夜可作為增加中性脂質(zhì)含量的陽(yáng)性對(duì)照，因?yàn)橛退崾歉视腿ズ铣珊蛢?chǔ)存的有效誘導(dǎo)劑。不含脂肪酸的 BSA 作為對(duì)照。

2. 在感興趣的時(shí)間點(diǎn)，在 PBS 中制備 2 μM BODIPY 493/503 染色溶液。

3. 使用 3 ml PBS 快速漂洗細(xì)胞以去除培養(yǎng)基/血清。

4. 在 BODIPY 493/503 染色液中于 37 °C 避光孵育 15 分鐘。包括用于流式細(xì)胞術(shù)的未染色控制。

5. 使用 3 ml PBS 快速漂洗細(xì)胞以去除染色液。

6. 用胰蛋白酶消化細(xì)胞以產(chǎn)生單細(xì)胞懸液。對(duì)于本協(xié)議中使用的 A498 細(xì)胞系，細(xì)胞在 37°C 下與胰蛋白酶-EDTA（0.25%）孵育 5 分鐘。

7. 加入 5 ml PBS 并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到 15 ml 錐形管中。

8. 以 250×g、5 分鐘、4 °C 沉淀細(xì)胞。

9. 吸出上清液，用 3 ml PBS 快速漂洗細(xì)胞沉淀，并以 250 × g，5 分鐘，4 °C 沉淀細(xì)胞。

10. 小心吸出上清液并在 300 μl 1x 流式細(xì)胞術(shù)緩沖液中重懸細(xì)胞。

11. 將細(xì)胞懸液通過(guò) 35 μm 過(guò)濾器放入 FACS 管中。

12. 進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。每個(gè)條件至少獲得 10,000 個(gè)事件。

13. 將數(shù)據(jù)分析為平均熒光或?qū)?shù)據(jù)顯示為直方圖。

3. Oil Red O

油紅 O （Catalog No.:GC25676）是一種溶血色素（脂溶性染料）重氮染料，用于冷凍切片上的中性甘油三酯和脂質(zhì)以及石蠟切片上的一些脂蛋白的染色。它具有紅色粉末的外觀，最大吸光度為 518 納米。

1. 制備儲(chǔ)存液

0.1 g 油紅 O 溶于 20 mL 丙二醇。

2.細(xì)胞染色

2.1 將冷凍切片的組織載玻片風(fēng)干并用 4% 多聚甲醛固定。

2.2在室溫下用油紅 O 溶液染色 30 分鐘。

2.3 用蒸餾水沖洗 10 分鐘。

2.4 載玻片用明礬蘇木精輕輕染色 1 分鐘。

2.5用蒸餾水沖洗，并安裝用于顯微鏡檢查。

4. 其他脂滴熒光探針

Cat.No.	Product Name	Information
GC42964	BODIPY-Cholesterol	BODIPY-cholesterol is a biologically active and cel-permeable analog of cholesterol that is tagged with a fluorescent BODIPY group at carbon 24.
GC42249	3-BODIPY-propanoylaminocaproic Acid N-hydroxysuccinimide ester	3-BODIPY-propanoylaminocaproic acid N-hydroxysuccinimide ester (BODIPY FL-X SE) is an amine-reactivefluorescent probe.
GC44574	PBD-BODIPY	PBD-BODIPY is a probe for the spectrophotometric measurement of autoxidation reactions.
GC42960	BODIPY 505/515	BODIPY 505/515, a lipophilic fluorescence dye, emits fluorescence has been used extensively for lipid droplet labeling (Ex/Em: 505/515 nm).
GC42963	BODIPY-C12 Ceramide (d18:1/12:0)	BODIPY-C12 Ceramide (B12Cer) is a fluorescently-tagged form of C12 ceramide that displays excitation/emission maxima of 505/540 nm, respectively.
GC42962	BODIPY 630/650X succinimide ester	BODIPY 630/650X succinimide ester is a fluorescent conjugate of the adenosine receptor ligand N-ethylcarboxamido-adenosine (NECA).
GC42959	BODIPY 493/503	BODIPY 493/503, a lipophilic fluorescence dye, emits bright green fluorescence has been used extensively for lipid droplet labeling (Ex/Em: 493/503 nm).
GC40165	C11 BODIPY 581/591	C11-BODIPY581/591 is a fluorescent ratio-probe of lipid oxidation.
GC42961	BODIPY 558/568 C12	BODIPY 558/568 C12 is a fatty acid-conjugated fluorescent probe for lipid droplets.

所以，小伙伴們，現(xiàn)在你們已經(jīng)知道了脂滴是什么了，它們是細(xì)胞內(nèi)的重要組成部分，不僅僅是能量?jī)?chǔ)備庫(kù)，還能幫助細(xì)胞完成很多生物學(xué)功能。是不是覺(jué)得很神奇呢？趕快去看看你身邊的細(xì)胞，是不是也有一些小小的圓圓的小球球在里面跳。

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