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從有限的細(xì)胞中提取 RNA

發(fā)布時(shí)間： 2023-04-21　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1343次

材料與儀器
LCM 帽子
乙醇糖原 RNA 提取試劑盒超純水
移液器
步驟
一、材料

1. 緩沖液、試劑和溶液

75% 乙醇 (超純水配制）

糖原，5 mg/ml(Ambion，Austin，TX)

StratageneRNA 提取試劑盒（200345，StratageneCloningSystems，LaJolla,CA)，

包括變性溶液、飽和酚 (存于 4°C)、β-巰基乙醇 (存于 4°C)、氯仿：異戊醇、

2mol/L 乙酸鈉、異丙醇?；蛘呤褂?PicoPureRNA 分離試劑盒（KIT0202，Arcturus，

MountainView,CA)

DEPC 處理的超純水 (BiotecxLaboratories，Houston，TX)(4°C 儲(chǔ)存）

2. 特殊設(shè)備

移液器

無(wú) RNA 酶的 1.5 ml 管子

3. 細(xì)胞和組織

來(lái)自方案 3 的 LCM 帽子

二、方法

1. 加入 200ul 變性溶液和 1.6ulβ-巰基乙醇到 0.5 ml 管子中。

2. 將 LCM 帽子插入管子，渦旋 5s。

3. 倒置管子孵育 5 min。

4. 移去 LCM 帽子。這一步獲得的樣品可以在-80°C 保存 6 個(gè)月。

5. 將溶液轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 管子中。

6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸鈉，溫和混勻。

7. 加入 220ul 水飽和的酚（底層），溫和混勻。

8. 加入 60ul 氯仿：異戊醇，劇烈晃動(dòng)。

9. 放于冰上 15 min。

10.14000r/min4°C 離心 30 min。

11. 吸上層溶液到新管子中。

12. 加入 2ul 糖原（最終濃度 10~150ug/ml)。

13. 加入 200ul 冷異丙醇。

14.-80°C 過(guò)夜。

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