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細(xì)胞復(fù)蘇

發(fā)布時間： 2023-01-11　　點擊次數(shù)： 1395次

簡介
細(xì)胞復(fù)蘇是將凍存在液氮中的細(xì)胞解凍之后重新培養(yǎng)，細(xì)胞恢復(fù)生長的過程。
材料與儀器
器材：37℃ 水浴箱、離心機、無菌試管以及培養(yǎng)瓶。

試劑：

① 含 20％血清 RPMI 1640 培養(yǎng)液；

步驟
細(xì)胞復(fù)蘇的基本過程可分為如下幾步：

A 從液氮中取出細(xì)胞安瓿或凍存管，置 37℃ 水浴中迅速融化，一旦冰塊消失即將凍存管從水浴中取出。

B 用 70％乙醇擦洗凍存管外部以減少污染機會。

C 吸取凍存管內(nèi)容物緩慢加入含 4-5 ml 培養(yǎng)液的 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置 5％CO2、37℃ 細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，次日換液。也可通過離心去除細(xì)胞保護劑，再進行細(xì)胞培養(yǎng)。

注意事項
凍存細(xì)胞并非能達(dá)到 100％復(fù)蘇成功。復(fù)蘇失敗可能與以下因素有關(guān)，凍存時細(xì)胞數(shù)量少或生長狀態(tài)不良；細(xì)胞受細(xì)菌或支原體污染；液氮罐保管不善；復(fù)蘇時培養(yǎng)條件改變，如將胎牛血清換成小牛血清；復(fù)蘇方法不得當(dāng)?shù)取?/p>

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