无码精品人妻一区,婬荡的女教师4波多野结衣,日韩中文字幕人妻,精品国产野战视频在线

技術(shù)文章ARTICLE

您當(dāng)前的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）原代培養(yǎng)

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）原代培養(yǎng)

發(fā)布時(shí)間： 2023-01-11　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1453次

原理
將小鼠的胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）從機(jī)體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細(xì)胞，置MEF生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。
材料與儀器
孕鼠
PBS EDTA 胰酶 MEF生長培養(yǎng)基 FBS 高糖DMEM
眼科直剪眼科直鑷眼科彎鑷玻璃平皿3 尼龍濾網(wǎng) 離心管手術(shù)刀片
步驟
一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備

1. 動(dòng)物

孕期14至16天的孕鼠(小鼠)。

2. 試劑
無Ca2+和Mg2+的PBS(D-PBS)、0.05%胰酶、0.53 mmol/L EDTA溶液、MEF生長培養(yǎng)基(高糖DMEM加10%FBS)。

3. 器械

眼科直剪3把、眼科直鑷3把、眼科彎鑷2把、玻璃平皿3套、200目尼龍濾網(wǎng)、50 ml和15 ml離心管和手術(shù)刀片。以上物品均需要高壓滅菌消毒處理。

二、具體操作

1. 處死孕鼠，全身置于75%酒精里浸泡，然后在超凈臺(tái)中用剪刀和鑷子將孕鼠皮膚剪開，用另外一組剪刀、鑷子剪開腹部肌層，露出子宮，最后用第三組剪刀和鑷子將子宮小心取出放在盛有D-PBS的玻璃平皿中，沖洗去血。

2. 用兩把彎鑷子將胚胎外的胞膜小心去除，然后夾掉頭和內(nèi)臟，將其余胚胎轉(zhuǎn)移到一個(gè)裝有30 ml D-PBS的50 ml離心管中，輕輕顛倒兩次，倒掉D-PBS，再重復(fù)此步驟一次，注意要留少許D-PBS，然后將胚胎轉(zhuǎn)移到另一裝有D-PBS的平皿中，并用手術(shù)刀片將其細(xì)細(xì)切碎。

3. 用200 ul的移液槍反復(fù)、快速地吹打平皿中的液體，轉(zhuǎn)移至15 ml離心管中，于4℃ 1500 rpm離心5分鐘，倒掉上清，以10 ml胰酶重懸沉淀，放在37℃水浴中消化30分鐘，且每隔五分鐘輕輕晃動(dòng)，使之充分消化。

4. 將上層細(xì)胞懸液倒入一個(gè)裝有10 ml MEF生長培養(yǎng)基的50 ml離心管中，用200目的尼龍網(wǎng)過濾后，以1 500 rpm離心5分鐘收集細(xì)胞，再用30 ml MEF生長培養(yǎng)基洗滌兩次。

5. 細(xì)胞沉淀用15 ml MEF生長培養(yǎng)基重懸后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)(一般8只14天的胎鼠可獲得2-3x107細(xì)胞)。

6. 3x106細(xì)胞懸浮于15 ml MEF生長培養(yǎng)基中，接種到200 ml培養(yǎng)瓶中。

7. 24小時(shí)后更換新鮮的MEF生長培養(yǎng)基。

8. 細(xì)胞長滿后，先用D-PBS沖洗，倒掉后加胰酶消化(此步時(shí)間不宜過長，作者一般不超過五分鐘)，按1:5傳代。

9. 細(xì)胞再次長到覆蓋率80-90%左右，將其消化后，常規(guī)凍存(凍存液要現(xiàn)配)。

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF 100倍)
注意事項(xiàng)
1. 原代培養(yǎng)，一定要避免污染。

2. MEF生存能力有限，如果不凍存，體外存活十代左右。

3. 凍存后復(fù)蘇的細(xì)胞只能傳代一次，因?yàn)檫@些細(xì)胞繁殖能力有限。

4. 消化細(xì)胞時(shí)間不要過長。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。

下一篇：混合淋巴細(xì)胞增殖

上一篇：Nunc細(xì)胞工廠

產(chǎn)品中心 Products

蜜桃免费观看电视剧高清完整版_女人吃精子的好处与功效_欧美变态口味重另类av电影邢房_亚洲国产sexxxxx在线一区_蜜乳av_催眠控制小说_野战肉高h男友和闺蜜_熟妇与小伙子matur老熟妇e_惩罚小核不停高潮h_男男gay互吃呜巴吞精

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）原代培養(yǎng)