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小鼠MSC細(xì)胞的提取操作
發(fā)布時(shí)間： 2023-01-04 點(diǎn)擊次數(shù)： 2629次MMSC細(xì)胞一般采用，長(zhǎng)骨解剖和骨髓分離程序，總體目標(biāo)是快速、系統(tǒng)地取出長(zhǎng)骨，并收集骨髓細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)分析。這種方法有助于回答有關(guān)骨髓生物學(xué)、腫瘤轉(zhuǎn)移和免疫學(xué)的關(guān)鍵問(wèn)題。這項(xiàng)技術(shù)的主要優(yōu)點(diǎn)是解剖過(guò)程快速、標(biāo)準(zhǔn)化，骨髓分離程序相當(dāng)無(wú)菌，首先處死小鼠并將小鼠置于仰臥位。
然后將小鼠的四個(gè)爪墊固定在踝關(guān)節(jié)下方，用70%乙醇噴灑小鼠，徹-底沖洗腿部。下一步，在臀部正上方的下腹部中線右側(cè)做一個(gè)小切口，將切口向下延伸到腿部，穿過(guò)踝關(guān)節(jié)。拉回皮膚。
然后切開(kāi)固定在股骨近端的股四頭肌，露出大腿骨的前側(cè)，并用銷釘將肌肉從腿部固定出來(lái)，與木板成45度角。用剪刀抵住股骨后側(cè)，從膝關(guān)節(jié)上剪下腘繩肌。然后將固定在股骨近端的皮膚和腘繩肌向后拉，露出骨的后側(cè)，并將腘繩肌從腿部固定出來(lái)，使固定銷成45度角。
用鑷子抓住股骨遠(yuǎn)端，剛好在膝關(guān)節(jié)上方。然后引導(dǎo)股骨干兩側(cè)的剪刀刀片朝向髖關(guān)節(jié)。到達(dá)股骨頭后，扭轉(zhuǎn)剪刀，將頂部刀片直接移到股骨頭上方，使股骨脫臼。
用鑷子抓住股骨干的頂部，從股骨頭上切下軟組織，將股骨從髖臼中取出。然后將整個(gè)腿骨，包括股骨、膝蓋和脛骨向上拉離身體，小心地切斷連接腿部與皮膚的結(jié)締組織和肌肉。當(dāng)所有的結(jié)締組織都被移除后，拉伸踝關(guān)節(jié)并扭轉(zhuǎn)剪刀，使脛骨脫臼。
抓住脛骨遠(yuǎn)端，注意不要切斷肌腱，將脛骨向上拉離身體和釘板。然后去除任何殘留在膝蓋長(zhǎng)骨上的結(jié)締組織，以及任何附加在股骨和脛骨上的肌肉或結(jié)締組織。抓住股骨，使髕骨朝外，股骨頭朝下。
過(guò)度伸展膝關(guān)節(jié)，扭動(dòng)剪刀，使脛骨與股骨脫臼。然后移除所有連接股骨和脛骨的結(jié)締組織。下一步，抓住股骨，使前側(cè)朝外，股骨頭朝下，然后將剪刀沿股骨干向上引導(dǎo)至髁部。
輕輕地來(lái)回旋轉(zhuǎn)剪刀，去除髁突、髕骨和骨骺，露出干骺端。然后，用鑷子、剪刀和低塵擦拭紙去除任何附加在股骨上的肌肉或結(jié)締組織。下一步，抓住脛骨，前側(cè)朝外，踝端朝下。
如果脛骨骨骺完好無(wú)損，將剪刀沿脛骨軸向上引至髁突處，輕輕來(lái)回轉(zhuǎn)動(dòng)剪刀，將髁突和骨骺切除，露出脛骨干骺端。然后移除任何附加在脛骨上的肌肉或結(jié)締組織，如剛才所示。為了獲取骨髓，首先用一根18號(hào)的針穿過(guò)一根0.5毫升的微量離心管的底部。
然后把長(zhǎng)骨放進(jìn)管子里，膝蓋朝下，蓋上蓋子。將0.5毫升的微型離心管放入1.5毫升的微型離心管中，并在大于或等于10000倍g的微型離心管中離心15秒。通過(guò)目視檢查確認(rèn)骨髓已經(jīng)從骨頭中旋出。
•使用10mL注射器，抽出骨髓細(xì)胞
•轉(zhuǎn)移至50mL錐形管中，用FSB將體積增加至50mL
•將50uL樣品轉(zhuǎn)移到eppendorf試管中，并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)
•以1200轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)細(xì)胞8分鐘
•從離心細(xì)胞中倒出上清液，轉(zhuǎn)入干細(xì)胞完-全培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)
正常培養(yǎng)第一天 正常培養(yǎng)第三天
提取的小鼠的MMSC-bm
間充質(zhì)干細(xì)胞完-全培養(yǎng)基進(jìn)行純化和培養(yǎng)。
以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。
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