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多能ES細(xì)胞的培養(yǎng)
發(fā)布時間： 2022-12-01 點(diǎn)擊次數(shù)： 1421次材料與儀器
PBS 胰酶溶液
MEF 滋養(yǎng)板 巴斯德吸管 ES 生長培養(yǎng)基步驟
1. 準(zhǔn)備下列試劑和材料：
60 mm MEF 滋養(yǎng)板（接種不能超過 7 天）
帶棉塞無菌巴斯德吸管
無 Ca2+ 和 Mg2+ PBS
ES 生長培養(yǎng)基
胰酶溶液
2. PBS 沖洗 ES 細(xì)胞，巴斯德吸管加胰酶溶液覆蓋培養(yǎng)皿底（2 ml/p60）
3. 37℃ 孵育 5 分鐘左右，至細(xì)胞脫落。
4. 巴斯德吸管輕輕吹吸胰酶處理細(xì)胞 4~6 次，分散 ES 細(xì)胞。分散的細(xì)胞，包括單細(xì)胞和小的細(xì)胞團(tuán)，轉(zhuǎn)移至裝有 2 ml 預(yù)熱（37℃）ES 生長培養(yǎng)基的 15 ml 離心管。
5. 離心收集細(xì)胞。吸掉上清，留約兩倍于細(xì)胞沉淀的體積。輕彈離心管懸浮細(xì)胞。加 10 ml ES 生長培養(yǎng)基，吹吸至懸液均勻。
6. 計(jì)數(shù)細(xì)胞。由于 ES 細(xì)胞較 MEF 細(xì)胞小，呈圓形，二者很容易區(qū)分。
7. ES 細(xì)胞接種 60 mm MEF 滋養(yǎng)板。吸掉 MEF 滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基，加入懸于 5 ml ES 生長培養(yǎng)基的 ES 細(xì)胞。
8. 每天換一次液，加 5 ml ES 生長培養(yǎng)基。以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)
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