-
腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)實驗
發(fā)布時間： 2022-10-20 點擊次數(shù)： 1332次原理
腫瘤組織及細(xì)胞在模擬體內(nèi)生長環(huán)境的條件下、與一般組織細(xì)胞一樣、也能夠生長發(fā)育乃至繁殖、為研究癌變機理、抗癌藥檢測、腫瘤分子生物學(xué)提供大量的實驗材料。
材料與儀器
腫瘤組織
培養(yǎng)液 Hanks 胰蛋白酶 EDTA 膠原酶
培養(yǎng)瓶 培養(yǎng)皿 吸管和膠帽 眼科剪 眼科鑷 二氧化碳培養(yǎng)箱 超凈工作臺步驟
一、取材
人腫瘤細(xì)胞來自外科手術(shù)或活檢瘤組織。取材部位非常重要，體積較大的腫瘤組織中有退變或壞死區(qū)，取材時盡量避免用退變組織，要挑選活力較好的部位。癌性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是好的培養(yǎng)材料。取材后宜盡快進行培養(yǎng)，如因故不能立即培養(yǎng)，可貯存于4 ℃中，但不宜超過24 小時。
二、培養(yǎng)基
腫瘤細(xì)胞對培養(yǎng)基的要求不如正常細(xì)胞嚴(yán)格，一般常用的RPMI 1640、DMEM、Mc-Coy5A等培養(yǎng)基等皆可用于腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。腫瘤細(xì)胞對血清的需求比正常細(xì)胞低，正常細(xì)胞培養(yǎng)不加血清不能生長，腫瘤細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中也能生長。腫瘤細(xì)胞對培養(yǎng)環(huán)境適應(yīng)性較大，是因腫瘤細(xì)胞有自泌（Autocrine）性產(chǎn)生促生長物質(zhì)之故。但這并不說明腫瘤組織*不需要這些成分。按不同細(xì)胞需要不同的生長因子；腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間、腫瘤細(xì)與腫瘤細(xì)胞之間對生長因子的需求都存在著差異。但大多數(shù)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中仍需要生長因子，有的還需特異性生長因子（如乳腺癌細(xì)胞等）?？傊囵B(yǎng)腫瘤細(xì)胞仍需加血清和相關(guān)生長因子培養(yǎng)更易成功。
三、成纖維細(xì)胞的排除
成纖維細(xì)胞常與腫瘤細(xì)胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細(xì)胞。而且成纖維細(xì)胞常比腫瘤細(xì)胞生長得快，最終能壓制腫瘤細(xì)胞的生長。因此排除成纖維細(xì)胞成為腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵。排除成纖維細(xì)胞有多種方法。
(1)刮除法：鏡下觀察腫瘤細(xì)胞，并在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿底部做下標(biāo)記，再用無菌膠刮刮除無標(biāo)記區(qū)域。
(2)反復(fù)貼壁法：腫瘤細(xì)胞貼壁速度比成纖維細(xì)胞慢，把含有兩類細(xì)胞的懸液反復(fù)貼壁，則成纖維細(xì)胞先貼壁而腫瘤細(xì)胞后貼壁，來達(dá)到分離兩類細(xì)胞的目的。
取A、B、C三個培養(yǎng)瓶，先于A中接種入兩種細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基懸液，5～20min后輕輕將上清液吸出，接種至B，A中加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；培養(yǎng)B中細(xì)胞5～20min后，同樣方法將上清接種至C，再于C中加入*培養(yǎng)基。次觀察三瓶細(xì)胞，會發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞A>B>C，C瓶中主要為腫瘤細(xì)胞，如需純化，可反復(fù)處理。
(3)酶消化法：成纖維細(xì)胞對酶更為敏感，故加入胰酶或膠原酶消化的時候比腫瘤細(xì)胞更易于脫落?？捎阽R下觀察消化，待成纖維細(xì)胞脫落即刻終止消化，反復(fù)處理幾次可得較純的腫瘤細(xì)胞。
(4)復(fù)蘇、傳代和凍存同前。
注意事項
1. 腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)也應(yīng)該遵循無菌操作的原則。
2. 腫瘤細(xì)胞在體外不容易培養(yǎng)形成穩(wěn)定的細(xì)胞系，故欲獲得好的培養(yǎng)效果應(yīng)采取一些特別的措施，如加入某種特殊的底物，或者加入促細(xì)胞生長因子，甚至需要先用動物轉(zhuǎn)嫁接種成瘤以獲得更好的活性。
3. 因為某些腫瘤是病毒感染導(dǎo)致，所以腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)注意自我防護。
以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)
-
血清系列
-
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
-
支原體清除
-
細(xì)胞凍存
-
實驗耗材
-
分子試劑
-
細(xì)胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養(yǎng)基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO（東洋紡）
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner（格瑞納）
-
IKA（艾卡）
-
化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測
-
細(xì)胞生物學(xué)
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細(xì)胞類-實驗耗材
-
原代細(xì)胞
-
植物檢測系列試劑盒
-
SERANA
-
細(xì)胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）
-
類器官培養(yǎng)
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質(zhì)
-
細(xì)胞因子分子
-
生物樣本庫
-
蛋白研究系列
-
修飾檢測試劑盒
