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堿裂解法質(zhì)粒抽提試劑盒的原理是什么？
發(fā)布時間： 2022-06-08 點擊次數(shù)： 3673次這次講解堿裂解法，從大腸桿菌中抽提質(zhì)粒的基本原理。
我們將搖菌得到的混合物離心，去除培養(yǎng)基，就可以獲得大腸桿菌，加入溶液1重懸。溶液1含緩沖成分，和抑制Dnase的EDTA。加入溶液2，含NaOH和SDS。在強堿環(huán)境下，細菌的細胞壁和細胞膜被破壞，釋放出基因組DNA和質(zhì)粒DNA。此時基因組DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)被破壞，發(fā)生變性。質(zhì)粒DNA也會發(fā)生變性，但兩條互補鏈仍會互相盤繞，并緊密的結(jié)合在一起。
當(dāng)加入溶液3（含醋酸鉀溶液）使pH恢復(fù)中性時，共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA復(fù)性快，而線性的染色體DNA復(fù)性緩慢，細菌蛋白質(zhì)、破裂的細胞壁和變性的染色體DNA會相互纏繞成大型復(fù)合物，被十二烷基硫酸鹽包蓋，從溶液中有效地沉淀下來。經(jīng)過離心除去變性劑后，就可以從上清中回收復(fù)性的質(zhì)粒DNA。
質(zhì)粒抽提試劑盒中，通常還有 DNA吸附柱，將質(zhì)粒DNA吸附，其他的雜質(zhì)被洗去。最后用洗脫液，將質(zhì)粒DNA洗脫下來。
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