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測定用乙醇固定的 DNA 的含量

發(fā)布時間： 2021-12-17　　點擊次數(shù)： 1432次

原理
DNA和RNA在260nm處有一很高的吸收峰，利用這個原理我們測其OD260，再推算出其濃度。
材料與儀器
細胞樣品
PBS緩沖液 70%乙醇 PI液
離心機恒溫箱篩網(wǎng)
步驟

一、培養(yǎng)細胞的 DNA 含量的測定

制備單細胞懸液于 200μ l 的 PBS 緩沖液中；加入 2ml 預冷的 70%乙醇，4℃保存；

1. 取單細胞懸液 1——2×106 個細胞于 PBS（PH=7.2）緩沖液中；

2. 300g 離心 5 分鐘，棄上清，反復兩次；

3. 重懸細胞于 0.5ml PBS 緩沖液中；

4. 將細胞懸液放置于 2——3ml 冷 70%乙醇中，混勻，保存于4℃，至少30 分鐘。在 4℃條件下可保存 2——3 周。

2、新鮮組織的 DNA 含量的測定

1. 用 200mg 濕重組織用機械法制成單細胞懸液；

2. 500g 離心 5 分鐘；

3. 棄上清，重懸于 10ml 染色- 去污劑中；

4. 再過濾，用 200 目的篩網(wǎng)或 70——80μm 的篩網(wǎng)過濾；

5. 上機檢測。

3、石蠟包埋組織切片的 DNA 含量的測定

1. 從石蠟包埋切取切片 50 μ m 厚，2——3 片，制成單細胞懸液；

2. 用 PBS 緩沖液洗滌，500g 離心 5 分鐘，棄上清；

3. 加入 PI 液 1ml 室溫避光 30 分鐘；

4. 調(diào)整細胞濃度為 1×106/ml；

5. 上機檢測。

注意事項
1. 根據(jù)實驗的要求，固定劑也可選用 1——3%多聚甲醛;

2. 將乙醇作為固定劑時，乙醇應(yīng)預冷至 0——4℃;

3. 細胞在固定時，固定劑應(yīng)緩慢滴入細胞懸液中，使固定劑的濃度緩慢增加，并不斷震搖，以免細胞成團（特別是用乙醇固定時） .

常見問題
如果想要檢測樣品的純度,那么還要再測一次280nm處OD值,計算二者的比率,若比率接近2，說明樣品純度較高。
以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

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安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。

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