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細胞傳代的方法和注意事項都有哪些？

發(fā)布時間： 2021-12-08　　點擊次數(shù)： 5245次

在細胞傳代時，都應該用哪種方法較為合適？或者在做細胞傳代時都應注意哪些事項呢？怎樣才能做好細胞傳代讓接下的實驗更順呢？帶著這些疑問，本期小編匯總些細胞傳代的經(jīng)驗分享給大家，希望對大家做細胞傳代時有所幫助。

1、細胞傳代的方法都有哪些？
根據(jù)不同的細胞采取不同的方法。貼壁生長的細胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細胞用直接吹打即可傳代；懸浮生長的細胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打。

2、原代培養(yǎng)的第一次傳代應注意的問題？
細胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前，不要急于傳代；原代培養(yǎng)時細胞多為混雜生長，不同的細胞有不同的消化時間，因此要根據(jù)需要注意觀察及時處理，并根據(jù)不同細胞對胰蛋白酶的耐受時間而分離和純化所需要的細胞；
吹打細胞時動作要輕巧盡可能減少對細胞的損傷；第一次傳代時細胞接種數(shù)量要多一些，使細胞能盡快適應新環(huán)境而利于細胞生存和增值；隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳入新的培養(yǎng)瓶。

3、使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的？應如何處理？
EDTA作用較胰蛋白酶緩和，主要作用在于能從組織生存環(huán)境中吸取Ca2+、Mg2+，這些離子是維持組織完整的重要因素。但EDTA單獨使用不能使細胞*分散，因而常與胰蛋白酶按不同比例混合使用，效果較好。常用比例為1：1或者2份EDTA：1份胰蛋白酶。EDTA的工作液濃度為0.02%，用不含Ca2+、Mg2+的BSS配置。如果使用EDTA，在終止消化前，需用緩沖液將消化液清除后才能加培養(yǎng)液。第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于 –20 ℃，避免反復冷凍解凍造成胰蛋白酶的活性降低，并可減少污染的機會。

4、欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉(zhuǎn)速？
欲回收動物細胞，其離心速率一般為800~1000 rpm，5~10 分鐘，過高的轉(zhuǎn)速，將造成細胞死亡。

5、細胞的接種密度為何？
依照細胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的重要原因之一。

6、細胞交叉污染的可能原因？
多種細胞系進行維持傳代操作時，各細胞系所需的器材和溶液沒有嚴格分開，往往會使一種細胞被另一種細胞污染。

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