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如何養(yǎng)好SH-SY5Y細(xì)胞？
發(fā)布時(shí)間： 2021-12-03 點(diǎn)擊次數(shù)： 2259次SH-SY5Y細(xì)胞于1970年構(gòu)建，是骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)3次克隆后得到的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。
如今，SH-SY5Y細(xì)胞已經(jīng)是科學(xué)研究中較為常用的細(xì)胞系之一了。
但很多人在養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞的過(guò)程中，總會(huì)遇到各種問(wèn)題。今天，小編來(lái)為大家一一解答。
SH-SY5Y細(xì)胞基本信息
細(xì)胞名稱(chēng)
SH-SY5Y (人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)
細(xì)胞別稱(chēng)
SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y;
SK-SH-SY5Y; SY5Y
種屬及來(lái)源
人（女性，4歲）
腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤，轉(zhuǎn)移部位骨髓
生長(zhǎng)特性
半貼半懸
生長(zhǎng)形態(tài)
上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)培養(yǎng)基
MEM/F12＋15% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境
氣相:95%空氣,5%CO2 溫度:37℃
推薦傳代比例
1：3-1：4
推薦換液頻率
48小時(shí)/次
凍存液配方
55% MEM/F12+40% FBS+5% DMSO
SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
01
收貨篇
常溫運(yùn)輸過(guò)程中，細(xì)胞不免受到震蕩和溫度變化的影響，出現(xiàn)皺縮、聚團(tuán)甚至脫落的現(xiàn)象。
遇到這種情況，不用緊張，只要正確處理，細(xì)胞就能恢復(fù)正常生長(zhǎng)。
收貨時(shí)皺縮
常溫細(xì)胞收貨后，把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)即可。
如果4小時(shí)后細(xì)胞仍然沒(méi)有鋪展開(kāi)，密度適中的前提下可以放培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜（過(guò)夜前倒出部分培養(yǎng)基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松）。
收貨時(shí)聚團(tuán)
常溫細(xì)胞收貨后，先把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài)，再進(jìn)行傳代。
傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。
收貨時(shí)脫落
常溫細(xì)胞收貨后，先把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài)再處理。
脫落后的細(xì)胞通常聚團(tuán)漂浮，通過(guò)離心將漂浮的細(xì)胞團(tuán)收集起來(lái)，在離心管里進(jìn)行胰酶消化后重新鋪板即可。
貼壁細(xì)胞常規(guī)方法消化下來(lái)，和處理好的脫落細(xì)胞合并，混勻后鋪板。
收貨脫落處理步驟
① 1200rpm（約250g）3min離心收集細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)基；
② PBS 重懸細(xì)胞，再次 1200rpm（約250g）3min離心，去除PBS；
③ 加入 1mL 左右 0.25%胰酶重懸細(xì)胞，吹打1-2下吹起沉淀即可；
④ 放入培養(yǎng)箱約 1-3min；
⑤ 用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散；
⑥ 迅速加入 3-5mL 含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化；
⑦ 1200rpm（約250g）3min離心，去除胰酶；
⑧ 加入新鮮培養(yǎng)基按合適比例接入無(wú)菌培養(yǎng)器皿中。
▲ 收貨時(shí)皺縮、脫落
▲ 處理后第三天
02
培養(yǎng)篇
SH-SY5Y細(xì)胞生長(zhǎng)較緩慢。在培養(yǎng)過(guò)程中，有以下幾點(diǎn)需要注意。
能否使用DMEM/F12
MEM/F12和DMEM/F12都可以培養(yǎng)SH-SY5Y，并且都有相應(yīng)的文獻(xiàn)支持。但這兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)出來(lái)的形態(tài)會(huì)有細(xì)微差異。
另外，使用品質(zhì)好的胎牛血清將極大改善細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
培養(yǎng)基容易變黃
因其神經(jīng)母細(xì)胞瘤的特性，SH-SY5Y細(xì)胞成簇生長(zhǎng)，飽和密度大。
有時(shí)顯微鏡下看著密度不高，但細(xì)胞簇實(shí)際密度大，所以培養(yǎng)基很快就變黃了。這時(shí)候，需及時(shí)換液。
生長(zhǎng)異常緩慢
當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)一周都無(wú)法傳代時(shí)，可以將細(xì)胞消化下來(lái)，接種到更小的容器中，人為增加細(xì)胞密度，從而促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。
平時(shí)傳代時(shí)也要注意接種密度不能太低。
傳代注意事項(xiàng)
不建議連續(xù)消化細(xì)胞，連續(xù)消化細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差。
傳代時(shí)消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，通常1-3min即可，若細(xì)胞解離太快可適當(dāng)用PBS稀釋胰酶。
吹打細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作輕緩一些，減少對(duì)細(xì)胞的物理刺激。
▲ SH-SY5Y正常生長(zhǎng)照片
03
形態(tài)篇
SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞同時(shí)存在，貼壁細(xì)胞呈上皮樣，有短觸角延伸出來(lái)，傾向于成簇生長(zhǎng)，容易成團(tuán)。
懸浮細(xì)胞過(guò)多
有文獻(xiàn)報(bào)道，SH-SY5Y在懸浮狀態(tài)也能維持生長(zhǎng)。
SH-SY5Y生長(zhǎng)時(shí)，大部分為貼壁細(xì)胞，少量為懸浮細(xì)胞。 如果SH-SY5Y出現(xiàn)大量懸浮的細(xì)胞，就需要引起注意了。
處理辦法
? 換液時(shí)將懸浮細(xì)胞離心收集，新鮮培養(yǎng)基重懸后接種回原瓶/原皿。
? 當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好、密度適中時(shí)，可以舍棄懸浮細(xì)胞。
成團(tuán)嚴(yán)重
另外，SH-SY5Y細(xì)胞非常敏感，在受到溫度、化學(xué)或物理刺激后容易出現(xiàn)成團(tuán)現(xiàn)象。
一個(gè)視野下，有少量成團(tuán)現(xiàn)象，無(wú)需特殊處理。成團(tuán)嚴(yán)重，幾乎沒(méi)有鋪展開(kāi)的細(xì)胞并且培養(yǎng)數(shù)天未展開(kāi)時(shí)，就需要按以下方法特殊處理一下了。
▲ 成團(tuán)較嚴(yán)重的SH-SY5Y細(xì)胞
處理辦法
方法一： 低密度接種，用胰蛋白酶消化細(xì)胞（不超過(guò)5min），按1：6比例傳代接種，并換新的培養(yǎng)器皿。延長(zhǎng)換液時(shí)間，3天換液一次，防止細(xì)胞脫落。
方法二： 使用多聚賴(lài)氨酸包被的培養(yǎng)器皿，以加快細(xì)胞貼壁速度，降低細(xì)胞聚集成團(tuán)的幾率。
方法三： 重新鋪板，并更換新配制的培養(yǎng)基，并加大血清比例（不超過(guò)20%）。
方法四：接種時(shí)，減少培養(yǎng)基量（如T25加3mL）以加快細(xì)胞貼壁速度，等待細(xì)胞貼壁后（約8-12小時(shí)），再補(bǔ)加培養(yǎng)基。
預(yù)防成團(tuán)的方法
? 控制細(xì)胞密度不超過(guò)80%，當(dāng)密度到達(dá)或超過(guò)80%及時(shí)傳代；傳代時(shí)切勿暴力吹打，避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械刺激。
? 使用質(zhì)量好的培養(yǎng)基和胎牛血清，減少內(nèi)毒素等有害物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的刺激。
? 請(qǐng)勿頻繁把細(xì)胞從培養(yǎng)箱拿出，氣溫低時(shí)需開(kāi)暖氣維持細(xì)胞房溫度；使用PBS、培養(yǎng)基前37度預(yù)熱，以避免溫差對(duì)細(xì)胞造成刺激。
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