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細胞培養(yǎng)無小事——貼壁細胞的消化方法

發(fā)布時間： 2021-09-29　　點擊次數(shù)： 3107次

如何消化讓細胞生長的更好，養(yǎng)細胞關(guān)鍵還是在消化，以下介紹幾種細胞的消化方法
一、酶消化法
1、胰酶，這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。消化的時間根據(jù)細胞種類、操作手法，溫度等因素而變化，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶，37℃一般在消化單層貼壁的細胞一般1-5分鐘就足夠了，用血清或者含血清的*培養(yǎng)基終止。
2、膠原酶，一般用于原代細胞消化，這種方法作用溫和，對細胞損傷較小，消化的時間也略長，不推薦的原因是膠原酶有點小貴而且培養(yǎng)細胞株感覺沒有多大的必要。

二、離子螯合劑
不破壞細胞表面分子，僅與CAMs螯合，因此，如果檢測細胞表面分子的話，盡量，甚至是一定不要用酶消化法。
1、EDTA，一般濃度在0.02%左右，使用它來消化細胞時，注意它能顯著影響pH值，而且在弱堿性條件下才易溶，而且它不能被終和，因此，消化下來的細胞一定要洗一遍。
三、物理法
直接吹打或用細胞刮刀，貼壁很牢的細胞可以使用這個方法，吹打和刮刀都會給細胞造成嚴重的損傷，建議不到萬不得已不要使用此法。
四、冷凍法
采用細胞冷凍后收縮的原理，從而使細胞從培養(yǎng)瓶上脫落。優(yōu)點：對細胞損傷小，不需要中止或洗細胞，方便，不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊，又特別嬌氣的細胞。缺點：細胞常成小片脫落，重新鋪板后細胞生長會有點聚團。常用于間充質(zhì)干細胞、DC細胞的消化，具體過程是：1、用較多的4℃的PBS洗滌一遍細胞，再加入適量的 4℃的PBS，靜置操作臺上，很快細胞受冷皺縮小片脫落，3、輕輕吹打，細胞即*脫落，4、按一定比例傳代。
細胞消化難題：
1，成團、絮狀：
消化液里加入edta可以減少細胞成團的現(xiàn)象，血清可以終止胰酶的作用，越好的血清使用的效價更高，用胰酶消化后加血清終止，如果消化液中加入了edta的話，就要將消化液倒干凈，如果細胞貼壁要求不是很嚴格的話，一般不需要進行離心。
比如說4T1細胞，這種細胞的貼壁能力天生很強，用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化10~12min。用PBS洗滌時要洗凈殘余的培養(yǎng)基，加入胰酶后在培養(yǎng)箱中消化(避免細胞室溫下受損以及在此溫度時胰酶活性*)至細胞收縮變圓(可顯微鏡下觀察)且有少許細胞脫落(呈流沙狀)，隨后立即棄去胰酶(如果脫落的細胞很多且需要大量細胞實驗，則不能棄去胰酶)，加入培養(yǎng)基輕輕彈散(不能用無血清培養(yǎng)基或者PBS替代，否則細胞聚集成團塊或絮狀)。
也可以用2%利多卡因消化5-8分鐘，然后再棄去。
消化過度怎么辦？
馬上用培養(yǎng)基中和，收集全部的細胞到無菌的離心管中800RPM 3分鐘。棄上清，用全培重懸，換新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)，狀態(tài)不好的細胞在培養(yǎng)的過程中會死亡脫落，在換液的時候可以清除掉。

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